口腔修复临床工作中,取印模及灌注模型等操作所引起的交叉感染,在国外已受到口腔医师的日益重视。Powell 等1 对100 份取自不同城市印模的检验表明,67 %样品有病原菌存在。Gerhardt 等2 的研究证明,藻酸盐印模表面有滞留、吸附病毒的能力。Leunge 等3 的研究显示,微生物可由印模污染石膏模、制作者,乃至打磨、抛光设备,从而引起交叉感染。据Runnell 4 的调查,美国修复科医生血浆中HBV 阳性率高达1712 % ,远高于美国大众的215 %。鉴于此,欧美国家的许多临床医师提出在修复操作中应严格遵守无菌操作原则,并展开了大量的研究工作。

      本研究比较2 %戊二醛和5 %艾力克浸泡或喷涂,以及臭氧柜对口腔印模及石膏模型的消毒作用,以探求适合我国国情的印模和石膏模型消毒方法。

1 　材料和方法

1. 1 　材料和设备

①Jeltrate 藻酸钾印模粉普通凝固型 ,用臭氧消毒柜处理2 h。

②石膏母模,橡皮碗,调拌刀,托盘等,120 ℃高压蒸气灭菌处理60 min。

③013 %Na2SO4 溶液,作为消毒剂的中和液。筛选实验证实本身及与消毒剂的反应产物对几种实验菌均无抑制作用。

④2 %戊二醛溶液(华西医科大学公共卫生学院配制) 。

⑤5 %艾力克溶液(华西医科大学公共卫生学院生产) 。

⑥臭氧消毒柜 。

⑦表皮葡萄球菌菌株、血液链球菌ATCC1057、枯草杆菌芽孢ATCC19659(均由华西医科大学口腔生物医学工程重点实验室微生物实验室提供) 。

⑧Die2stone人造石粉 。

1. 2 　材料制备

①制备细菌悬液 取4～14 代表皮葡萄球菌培养平板,挑取菌苔,以无菌生理盐水稀释至浓度108 个/ ml 。用同样方法分别制备血液链球菌悬液和枯草杆菌芽孢菌悬液。

②制取无菌印模和石膏模型 藻酸钾印模材料用无菌生理盐水调拌,用灭菌后的托盘及母模取57 个印模待用。制取24 个上颌石膏模型,经高温蒸气灭菌,然后用无菌生理盐水将其润湿待用。

1. 3 　实验分组和方法

1.3.1   分组　

      按照所涂细菌不同分为表皮葡萄球菌组、血液链球菌组和枯草杆菌芽孢组。每组中3 个无菌印模和3个无菌石膏模型不染菌作空白对照。余16 个印模和5 个石膏模型,用无菌棉签分别蘸取3 种不同细菌悬液在表面均匀涂抹两遍。然后再次分组作以下处理: ①2 %戊二醛处理组:1 个印模染菌后立即取样作阳性对照,1 个印模染菌后静置10 min 取样,3 个印模用2 %戊二醛浸泡10 min ,3 个印模以2 %戊二醛喷涂后10 min 取样。②5 %艾力克处理组:1 个印模染菌后立即取样作阳性对照,1 个印模染菌后静置10 min取样,3 个印模用5 %艾力克溶液浸泡10 min ,3 个印模以5 %艾力克液喷涂后10 min 取样。③臭氧柜处理组:1 个石膏模型染菌后立即取样作阳性对照,1 个石膏模型染菌后静置1h ,3 个石膏模型染菌后臭氧消毒柜处理1 h 取样。操作中,喷涂使用同一类型喷枪,喷嘴距印模表面20 cm ,以每秒1 次的频率喷涂10 次,控制喷涂压力一致。

1. 3. 2 　方法　

①所有印模均经中和液处理。吸取5 ml 中和液,分次冲洗印模表面,中和消毒剂防止其继续抑制细菌生长。石膏模型不用中和液处理。

②取样,接种菌落计数,每个印模及石膏模型表面各加注5 ml 无菌生理盐水,用振荡器以恒定功率振荡10 s ,再用微量吸管在各印模及模型表面的1 及6 舌面, 牙合面位置吸取10μl 液体,接种于培养平板。表皮葡萄球菌组与枯草杆菌组的平板,37 ℃需氧培养24 h 后进行集落形成单位(colony-forming unit ,CFU) 计数。血液链球菌组的平板,厌氧培养48 h 后进行CFU 计数。

2 　结 果

各组平板的CFU 计数结果见表1～3。

      消毒效果的评价指标以抑菌率为准5 ,抑菌率= (对照组回收菌数- 消毒组回收菌数) / 对照组回收菌数×100 %。由于每个印模或石膏模型表面接种菌液浓度一致,取样接种量均为10μl ,故以CFU计数表示回收菌数。以染菌后静置组作为对照组,算得各组平板的抑菌率,结果见表4。

以α= 0. 05 为检验水准,用SAS 软件对表4 数据进行统计处理。

      从表4 可见,2 %戊二醛浸泡、喷涂,5 %艾力克浸泡、喷涂,臭氧柜5 种方式对表皮葡萄球菌和血液链球菌的抑菌率无显著性差异( P > 0105) 。在枯草杆菌芽孢组,2 %戊二醛浸泡与喷涂间,5 %艾力克浸泡与喷涂间,臭氧柜处理与其它各法间对枯草杆菌芽孢的抑菌率均有显著性差异( P < 0105) 。2 %戊二醛浸泡与5 %艾力克浸泡其抑菌率无显著性差异( P> 0105) ,2 %戊二醛喷涂与5 %艾力克喷涂其抑菌率无显著性差异( P > 0105) 。

3 　讨 论

      对消毒剂、消毒方式的评价实验,按目的可分为三期6 :第一期是实验室试验,用以测定一种制剂是否有抗微生物作用;第二期是在实验室内模拟实际情况,以检验消毒程序;第三期是现场进行试验,因其标准化实验条件难以实现,故不常用。本部分研究属第二期。

      不同细菌对消毒方式有着不同的耐受力,故消毒学试验选用的菌种应为有代表性的标准菌株,或者是有实际意义,和对此种消毒方法有较高耐受性的菌株。目前国外对印模消毒效果的评价研究,采用的细菌标本多为混合菌液7 ,或为一些抵抗力不强的细菌8 ,如链球菌、金色葡萄球菌、大肠杆菌等。但这些细菌既不是口腔常见细菌,又抵抗力较差。故本研究选用的是表皮葡萄球菌、血液链球菌和枯草杆菌芽孢。血液链球菌系口腔很常见的细菌,在牙齿沟裂中检出率可高达80 %10 ,为牙菌斑主要菌成分之一,亦是一种条件致病菌。表皮葡萄球菌则是院内感染很常被讨论的细菌之一。枯草杆菌芽孢接种复活后,以繁殖体与芽孢形式混合存在,而芽孢有较强的生命力,能抵抗各种恶劣条件,包括各种较温和的消毒措施。

      本研究选用中和剂是为了中和消毒剂作用,防止其继续抑制细菌生长。但为排除中和剂及其反应产物对细菌增殖及培养成份产生影响,应在使用前做筛选试验9 。经筛选试验表明013 %Na2SO4 溶液本身及其与2 %戊二醛或5 %艾力克的反应产物均不会对本研究使用的3 种实验细菌的生长繁殖产生影响。

      空白对照组的设立是为排除由操作原因可能带来的污染。培养结果可见本研究中对材料器械的消毒准备及操作过程是可靠的,均未带来污染。染菌后静置组的设立是为排除静置过程中细菌自然的死亡。

      从本研究可见,无论2 %戊二醛浸泡、喷涂,还是5 %艾力克浸泡、喷涂及臭氧柜处理对表皮葡萄球菌和血液链球菌均可达到高的抑菌率。此时,各种消毒措施亦不能体现出消毒效能的差别。这与Rugge2burg 等8 结果一致。而枯草杆菌芽孢,由于有较强的存活能力,短时间的浸泡、喷涂或臭氧柜处理对它均不能达到高的抑菌率,且各种消毒方式的效能也表现出了差别,即浸泡法强于喷涂法,更强于臭氧柜处理。

      笔者认为一种消毒方法要想达到高的消毒效能,除要求消毒剂自身有强的灭菌能力外,还要求其能与细菌充分接触,在局部达到并维持尽可能高的浓度。在这一点上,显然浸泡法比喷涂法更有优势,此优势在细菌具有较强的抵抗能力时体现更明显。而臭氧因其为气体,密度远小于液体,故消毒效能也明显低于浸泡法和喷涂法。本研究结果证明2 %戊二醛浸泡、喷涂与5 %艾力克浸泡、喷涂,均可作为有效的印模消毒方法,而臭氧柜消毒法则可作为石膏模型的消毒方式。

来源:华西口腔医学杂志